1．培養細胞
      取出裂解液，待融化后顛倒混勻數次，適量分裝凍存。在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其*終濃度為1mM）混勻，立即使用。

 貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞數秒后細胞就會被裂解。

懸浮細胞：收集培養細胞，離心去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3遍(如血清中的蛋白沒有干擾，也可以不洗)，用手指把細胞用力彈散，按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果細胞數量較大，應按50-100萬細胞/管分裝或根據細胞數量按比例增加裂解液。用手指輕彈管底以促進裂解液和細胞充分接觸，裂解完全時應無明顯的細胞顆粒。

裂解物經10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

 2．組織樣品 
      取Ep管，分別稱重標記，把組織剪切成小塊裝入Ep管中，稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不完全，可以適當增加用量；如需要的蛋白樣品濃度較高，可以適當減少用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

    如果組織樣品本身非常細小，如淋巴細胞，可直接加入裂解液，通過振蕩（Vortex）以使樣品裂解完全。

保存條件：
     PMSF需－20℃保存，裂解液若經常使用，可于4℃保存至少三個月。若長期保存，建議置于－20℃。

注意事項 ：
 1．為獲得*佳的實驗效果，可適當分裝使用，以盡量避免反復凍融。 
 2．PMSF應現用現加。 
 3．裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。 
 4．蛋白酶抑制劑均有較高的毒性，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸，請立即用流水沖洗，再向醫療保健結構咨詢。

包裝清單： 
              

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